手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

鸡MHC Ⅰα-生物素化序列融合基因的构建、表达及纯化

刘光亮;童铁钢;王群;肖一红;孟庆文;吴东来

  MHC-肽四聚体技术是近年来建立的检测特异性CTL的有效方法。为了构建鸡MHC- 肽四聚体,本试验克隆了莱航鸡MHC I α(B-Fα)全基因,利用软件分析了其信号肽序列,构建了缺失信号肽且拼接了BirA底物肽序列(BSP)的融合蛋白重组表达载体pET-B-Fα-BSP,在大肠杆菌中得到表达,并优化了表达条件。SDS-PAGE分析表明所得融合目的蛋白约为40kD, Western-blot分析结果显示该重组蛋白成功融合了6×His标签。在此基础上建立了变性状态下纯化包涵体的方法,获得了高纯度的B-Fα-BSP融合蛋白,为在体外构建鸡MHC-肽四聚体, 探讨禽类细胞免疫反应机制奠定了基础。……