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以胸苷酸合成酶基因为选择压力的穿梭质粒载体的构建

王春凤;秦泽荣;孙哲;刘尚高;王春凤

  以干酪乳杆菌L.casei34103染色体DNA为模板,利用PCR技术扩增出胸苷酸合成酶Thymidylate synthase,thyA)基因,回收纯化。选择以红霉素抗性为选择压力的可以在大肠杆菌和乳酸菌中穿梭表达的质粒pW425e为基本质粒,以thyA基因取代红霉素基因,获得重组载体并鉴定。此重组载体可以对thyA基因缺陷的大肠杆菌X51和嗜酸乳杆菌DOMLaS107进行功能弥补,即可以在没有外源性胸腺嘧啶核苷的LB和MRS培养基上生长。进而构建了以thyA基因为选择压力的非抗生素抗性穿梭表达载体,其大小为3716bps,并命名为pW425t。……