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应用RT-nested PCR检测禽流感病毒核酸

黄庚明;黄冰;陈系古;辛朝安

  参考禽流感病毒(AIV)A/Shearwater/Aust/1/72的核蛋白基因序列,选择保守的蛋白编码区域,设计并合成了一对外引物和一对内引物,建立并优化了检测AIV核酸的RT-nested PCR法,通过检测AIV感染的鸡胚尿囊液、实验室病料和临床病料,结果表明:RT-nested PCR法能鉴别出非免疫鸡胚尿囊液中的病毒,也能鉴别出感染后1~8天的AIV H7N3株。攻毒后第8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出AIV,第8天非免疫鸡泄殖腔拭子中AIV的最大检出率为5/10,第8天SPF鸡泄殖腔拭子中AIV的最大检出率为6/10。对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中AIV最佳检出时间均在攻毒后第5天。RT-nested PCR方法对临床样品中的AIV的最大检出率为6/7。经过核酸杂交验证,RT-nested PCR法具有很高的特异性和敏感性,也比较简便快速,为从分子水平探讨AIV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。……