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RT-PCR及RFLP分析技术对禽传染性支气管炎病毒的诊断和S1基因鉴别的研究

磨美兰;李康然;韦平

  本研究使用分别扩增整个S1糖蛋白基因(引物A)和S1糖蛋白基因N-端高变区Ⅰ(引物B)的两对引物对3个IBV标准株M41、Connecticut、Arkansas及5个地方分离株(C60,D41A,D41B,A1121,1171)进行RTPCR扩增。用引物A时,有5个IBV毒株扩增到目的片段(1720bp),地方分离株中有三个却扩增不到;用引物B时,所有8个IBV毒株均得到与预计大小相符的目的产物(228bp)。对1720bp的PCR产物用限制性内切酶Hae Ⅲ进行酶切,结果得出三个不同的RFLP图谱,其中M41、Connecticut、D41B具有相同的HaeⅢ酶切图谱,Arkansas和D41A则分别具有互不相同的图谱;对228bp的PCR产物进行Dde Ⅰ、Rsa Ⅰ限制性内切酶消化,根据它们的RFLP图谱,8个IBV毒株可分为五个基因型;综合两对引物的PCR产物的RFLP分析结果,8个IBV毒株可分为七个基因型,分型的结果与传统的血清学方法基本吻合。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、灵敏等优点,为现场流行毒株的定型(基因型/血清型)及其S1基因变异的研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基础。……   
[关键词]:IBV;S1基因;RT-PCR;RFLP
[文献类型]:会议论文
[文献出处]: 《中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集2000年