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牡蛎盐度胁迫相关基因的初步筛选、克隆及其功能分析

付定坤;何小翠;张扬;喻子牛

  利用抑制消减杂交技术(suppressive subtractive hybridization,SSH)初步进行了香港巨牡蛎(Crassostrea hongkongensis)盐度胁迫相关基因的筛选,构建了高盐度(30‰)和低盐度(3‰)海水胁迫的两个消减文库。通过大规模测序和生物信息学分析,得到了Hsp90、Catalase、MT、Ferritins、Cu/Zu SOD、Mn SOD、Ub_(L40)、F_1-ATPase subunit和F_1-ATPase subunit等多条与抗逆相关的EST(expressed sequence tag)序列。进而通过快速cDNA末端扩增(rapidamplification ofcDNA ends,RACE)方法获得了上述基因的全长序列。对香港巨牡蛎(C.hongkongensis)进行盐度胁迫的实验表明,在低盐度(3‰)胁迫的淋巴细胞中,热休克蛋白Hsp90的表达在24-72小时没有显著性变化,而到了96小时明显上调;高盐度(30‰)胁迫后48-72小时候表达量明显上调,在96小时恢复正常。……