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茶叶N-甲基转移酶基因的克隆

周英;陈忠正;李斌;黎秋华;杨飞芸;陈丽萍

  咖啡碱是茶叶和咖啡中的主要生物碱,咖啡碱合成代谢途径中包含两个关键的酶——N-甲基转移酶(NMT)和S-腺苷甲硫氨酸(SAM)合成酶。本研究以英红9号和福云6号茶叶为材料,利用RT-PCR技术对咖啡碱合成代谢途径中两个关键酶之一——N-甲基转移酶基因进行了克隆。结果显示,英红9号两个单株cDNA扩增后均得到长度为627bp片段,编码204个氨基酸;福云6号三个单株分别获得长度为432bp、637bp与627bp的三个片段,各自编码140个、140个与205个氨基酸。五个基因片段的核苷酸序列与茶叶TCS1基因同源性均为92%以上。基因保守结构域的分析结果表明,除福云6号一号单株缺少一个保守序列外,本实验获得的其它4个N-甲基转移酶基因片段中都包含了四个保守序列、三个SAM结合区A、B’、C及一个保守域VFFF,确认为茶叶N-甲基转移酶基因。……