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血红蛋白促进酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯产量的研究

孔建强;沈君豪;黄勇;王伟;程克;棣朱平

  目的提高酵母工程菌中紫穗槐-4,11-二烯的产量。方法紫穗槐-4,11-二烯是抗疟药物青蒿素的中间体,由紫穗槐-4,11-二烯合酶催化FPP环化形成。通过连续重叠PCR的方法将透明颤菌血红蛋白基因突变成用酵母偏爱密码子表示的序列Vgbm。构建了pYeDP60/GAPDH/Vgb和pYeDP60/GAPDH/Vgbm两个表达载体,将这两个表达载体分别导入紫穗槐-4,11-二烯酿酒酵母工程菌WK1中,得到两个酵母工程菌WK1[Vgb]和WK1[Vgbm]。以朱栾倍半萜为标准品,对WK1[Vgb]和WK1[Vgbm]发酵产物进行GC-MS定量检测。结果结果表明WK1,WK1[Vgb]和WK1[Vgbm]发酵产物均检测到了紫穗槐-4,11-二烯。而且WK1[Vgb]中紫穗槐-4,11-二烯的产量比WK1中的产量要高2倍,WK1[Vgbm]中紫穗槐-4,11-二烯的产量比WK1中的产量要高3倍。结论透明颤菌血红蛋白能够提高酵母工程菌紫穗槐-4,11-二烯的产量。……