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龙葵碱对HepG2人肝癌细胞NAT酶米氏常数及最大反应速率影响

高世勇;季宇彬;邹翔;万梅绪;张宇金

  目的探讨龙葵碱对HepG2细胞NAT酶米氏常数Km及最大反应速率Vmax的影响。方法采用高效液相色谱(HPLC)法,以2-AF为底物,以2-AF的浓度为底物浓度,在HepG2完整细胞及细胞质内2-AF被NAT酶乙酰化为2-AAF的速度为NAT酶的反应速率,采用双倒数作图法,以底物2-AF浓度的倒数1/S对NAT反应速率的倒数1/V作直线,得出回归方程,计算Km和Vmax。结果酶动力学研究表明,以2-AF为底物,对于HepG2完整细胞,阴性对照组的Km和Vmax分别为2.37×10-3±8.37×10-5mM,9.16×10-4±7.54×10-5nmol/106cells,龙葵碱组的Km和Vmax分别为2.22×10-3±9.05×10-5mM和5.14×10-4±3.72×10-5nmol/106cells。对于HepG2细胞质,阴性对照组的Km和Vmax分别为8.95×10-3±2.61×10-4mM,2.55×10-6±1.92×10-8nmol/min·mgprotein,龙葵碱组的Km和Vmax分别为9.48×10-3±3.63×10-4mM和2.43×10-6±1.32×10-8nmol/min/mgprotein,统计学表明对于HepG2完整细胞和细胞质,阴性对照组和龙葵碱组的Km没有差异,而Vmax统计学差异显著(完整细胞p<0.001,细胞质p<0.05);结论龙葵碱是NAT酶2-AF底物的非竞争性抑制剂。……