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GFP标记的重组新城疫病毒HN基因乳酸菌表达载体的构建

胡静涛;杨文涛;肖冲;王泽;丁壮;王春凤

  目的:构建具有示踪作用的重组新城疫病毒(NDV)HN基因乳酸菌表达载体,以用于制备NDV HN重组乳酸菌,进而研究其抗结肠癌功能和机制。方法:提取病毒总RNA,以RT-PCR方法扩增NDV HN,克隆至GFP示踪的乳酸菌表达载体pW425et/gfp中,构建的重组体电转化至植物乳杆菌NC8中。结果:采用质粒、酶切及PCR鉴定显示NDV HN基因与乳酸菌表达载体正确重组。SDS-PAGE检测荧光显微镜下观察到发绿色荧光的重组乳酸菌,结果显示表达出约46kDa的条带,与HN蛋白已知大小相符。Western blotting进一步证实该蛋白能被NDV阳性抗体所识别,具有反应原性。结论:在乳酸菌中表达了有免疫活性的NDV HN基因,为制备NDV重组乳酸菌及其抗结肠癌作用研究奠定基础。……