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猪繁殖与呼吸综合征病毒基因重组质粒实时荧光定量PCR标准曲线的建立

祝秀梅;马全英;王凡;吕志慧;杜平;刘学荣;牟克斌

  根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF7的核苷酸序列设计特异性引物,经RT-PCR扩增,增出大小为105bp的部分基因片段。用T4连接酶将目的片段与pMD-18T载体连接,并转化到大肠杆DH5α感受态细胞中。测序鉴定后,将重组质粒10倍系列稀释后作为标准模板,通过实时荧光定量PCR方法,建立了PRRSV的标准曲线及其直线回归方程。该方法具有线性关系好、特异性强、敏感性高、重复性等特点,为分析PRRSV感染猪体内病毒的绝对含量提供了必要的技术平台。……