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pComb3-KGF活性肽构建及促进表皮细胞增殖的研究

宗宪磊;姜笃银;付小兵

  目的构建展示pComb3-KGF活性肽,促进表皮细胞增殖。方法应用RT-PCR方法获得4个KGF基因;SpeI和XhoI双酶切目的基因及噬菌粒pComb3,将4个KGF基因亚克隆至pComb3;应用噬菌体呈现技术,将插入的基因展示于噬菌体表面;抽提纯化噬菌体DNA,进行酶切、PCR和测序鉴定;应用MTT方法检测pComb3-KGF活性肽促进表皮细胞增殖的作用,应用免疫荧光方法检测pComb3-KGF活性肽的细胞亲和力,应用RT-PCR方法检测pComb3-KGF活性肽对KGFR、c-Fos和c-Jun的表达水平的影响。结果应用RT-PCR方法获得目的基因,并构建在噬菌粒pComb3中,目的基因成功表达于载体表面;酶切、PCR和测序结果证实目的基因已成功构建在载体中;MTT结果显示4种pComb3-KGF活性肽均能够促进表皮细胞增殖;免疫荧光检测结果证明其具有较好的细胞亲和力;RT-PCR结果显示KGF及两种pComb3-KGF活性肽能够促进KGFR的表达,4种pComb3-KGF活性肽促进c-Fos和cJun表达的作用均弱于KGF。结论成功构建展示pComb3-KGF活性肽,能够显著促进表皮细胞增殖,但促进肿瘤基因c-Fos和c-Jun的表达弱于KGF。……