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体外神经块轴突机械划伤模型的建立

殷成;孙晓川;蒋理;朱继;张晓冬

  目的轴突再生的研究为现在神经研究的热点,本研究拟体外单独培养小鼠皮质神经块,建立机械划断轴突后的轴突再生模型。方法取新生一日龄小鼠脑组织,剥去脑膜后取皮质,剪刀剪碎皮质至0.3~0.5毫米左右脑组织块,将该组织块种板在多聚赖氨酸预处理的玻片上,加用胎牛血清24小时后全量换液为无血清培养基B27。7天后显微镜下机械划断轴突,刨去远端,继续使用无血清培养基B27进行培养。选择培养1天、7天以及划断后再生的神经块进行神经元特异性蛋白TubulinⅢ免疫荧光染色。结果神经元种板后4-6小时即贴壁,24小时后可见明显轴突生长,培养7天的神经块可见放射状的轴突生长出现。显微镜下机械划断轴突后,可以完全清除划断远端,24小时后即可见明显的轴突再生。进行神经元特异性蛋白TubulinⅢ免疫荧光染色可见培养1天、7天以及划断后再生的神经块轴突染色为明亮的绿色。结论体外无血清培养小鼠皮质神经块,可长出大量放射状轴突;机械切断轴突后,在无血清培养基B27中可观察到轴突的再生,该体外模型适用于轴突再生的研究。……