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大豆异黄酮对岭南黄羽肉鸡骨骼肌卫星细胞增殖和抗氧化作用的影响

蒋守群;蒋宗勇;林映才;马现永;邹书通

  本试验选用1日龄岭南黄羽肉鸡为动物模型,在无菌环境下分离其腿部骨骼肌,经过一系列前处理后得到骨骼肌原代细胞,用计数板计数,并稀释至5.0×105个/ml,然后接种至培养瓶中,用完全培养基在二氧化碳培养箱培养48h,再经0.25%胰蛋白酶消化传代,采用差速贴壁法得到骨骼肌卫星细胞,以 5.0×105个/ml浓度接种至96孔板和24孔板。试验共分5组,即在无血清培养液中分别添加0(对照组)、 12.5、25、50、75、100gmol/L的大豆异黄酮(大豆异黄酮预先溶解于二甲基亚砜中,培养液中均添加 80gmol/LH2O2/FeSO4进行氧化处理建立氧化模型),每组6个重复(孔),观察处理后骨骼肌卫星细胞的形态变化和采用MTT法测定骨骼肌卫星细胞的增殖情况。试验结果显示,在氧化环境中,大豆异黄酮可减少骨骼肌卫星细胞死亡,促进骨骼肌卫星细胞的增殖,其中大豆异黄酮处理24h后显著促进骨骼肌卫星细胞增殖的最低浓度为12.5μmol/L(P<0.01),12.5、25、50、75、100μmol/L大豆异黄酮处理组骨骼肌卫星细胞经MTT染色和SDS处理后的吸光度分别较对照组提高了45.90%(P<0.01)、58.64% (P<0.01)、60.21%(P<0.01)、46.42%(P<0.01)和25.48%(P<0.05)。试验还测定大豆异黄酮对各组细胞培养上清液中抗氧化作用因子(总超氧化物歧化酶T-SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px、过氧化氢酶CAT、肌酸激酶CK、乳酸脱氢酶LDH活性和总抗氧化能力T-AOC)的影响。结果表明,骨骼肌卫星细胞培养液中添加25、50、75、100μmol/L大豆异黄酮使细胞培养上清液中T-SOD活性较对照组分别提高17.02%(P<0.01)、13.00%(P<0.05)、13.26%(P<0.05)和11.89%(P<0.05),添加25μmol/L 大豆异黄酮使得GSH-px活性提高了90.68%(P<0.05),75μmol/L和100μmol/L大豆异黄酮处理组CAT 活性分别比对照组提高了49.17%(P<0.01)和49.13%(P<0.05),大豆异黄酮有提高细胞上清液中T-AOC 的趋势(P>0.05),添加75μmol/L和100μmol/L大豆异黄酮显著降低了细胞CK的分泌(P<0.05),但各添加水平的大豆异黄酮对细胞上清液中LDH活性无显著影响。上述试验结果说明,大豆异黄酮能促进骨骼肌卫星细胞在氧化环境中的增殖,提高骨骼肌卫星细胞的抗氧化能力,其中25μmol/L大豆异黄酮的添加水平对骨骼肌卫星细胞的增殖、细胞培养上清液中T-SOD和GSH-px活性影响的综合效果尤为显著。……