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对虾酚氧化酶原基因和溶菌酶基因ORF的分离与特征分析

叶星;郑清梅;白俊杰;吴锐全;劳海华;罗建仁

  酚氧化酶原和溶酶菌均是对虾重要的免疫因子。酚氧化酶原激活系统是甲壳纲、昆虫纲以及少数脊椎动物的识别和防御系统。溶菌酶是一种能水解粘多糖的碱性酶,能催化细菌细胞壁β-1,4糖苷键的水解,导致细菌细胞壁破裂而使细菌死亡。同时溶菌酶还可诱导调节其他免疫因子的合成与分泌,并协同其他免疫因子进行防御免疫。实验采用RT-PCR原理克隆了短沟对虾和斑节对虾的酚氧化酶原基因的开放阅读框ORF以及斑节对虾、短沟对虾和南美白对虾的溶菌酶基因ORF,并分别进行了序列结构与功能的分析。克隆的短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因ORF 长度分别为2055bp和2061bp,各编码684个和686个氨基酸。同源性分析显示短沟对虾和斑节对虾酚氧化酶原基因具有高度的同源性,二者的碱基和推测的氨基酸序列同源性分别为93%和92%;所克隆的3种对虾溶菌酶基因的ORF均为477 bp, 编码158个氨基酸,包括成熟肽140个氨基酸残基和信号肽18个氨基酸残基。3种对虾溶菌酶基因的推测氨基酸序列之间的同源性达87%以上。此外,通过基因工程技术获得了重组斑节对虾溶菌酶,初步的活性检测显示其对几个鱼病原菌菌株具有溶菌活力。……