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蛙虹彩病毒刺激下东北林蛙皮肤活性肽的表达变化

杨淑静;肖向红;苗慧敏;柴龙会;周旋;张晶钰

  本研究以两栖类代表物种东北林蛙(Rana dybowskii)为试验对象,以蛙类易感病原微生物虹彩病毒(Rana grylio virus,RGV)为特异刺激原,经腹腔注射后收集其皮肤分泌物,SephadexG-50凝胶过滤、RP-HPLC分离纯化,收集各主要色谱峰进行微生物活性试验,筛选有抑菌、抑病毒活性的色谱峰,进行质谱分析。并提取RGV刺激前后的东北林蛙皮肤总RNA,根据蛙属活性肽信号肽末端保守序列设计通用引物,RT-PCR扩增皮肤活性肽cDNA,进行克隆测序。以期探讨在蛙类易感病毒RGV胁迫下东北林蛙皮肤活性肽的表达变化,并筛选目的肽基因。质谱分析初步获得了9条序列,其中有3条为东北林蛙新发现肽,分别命名为Dybowskin-1YJ、Temperin-YJ、Ranatuerin-2YJ。同时以东北林蛙皮肤总RNA为模板扩增后筛选出了编码Dybowskin-YJ、Temperin-YJ、Ranatuerin-2YJ的cDNA。三条活性肽前体序列均由信号肽、酸性前肽、成熟肽组成,在成熟肽和酸性前肽之间具有成熟肽酶剪切位点Lys-Arg(KR)。其中Dybowskin-YJ和Ranatuerin-2YJ基因在刺激后表达呈现上调,且Ranatuerin-2YJ上调幅度较大,而Temperin-YJ基因在刺激前后变化不显著。微生物学活性分析显示,Dybowskin-YJ、Temperin-YJ、Ranatuerin-2YJ对革兰氏阴性菌(大肠杆菌E.coli、铜绿假单胞菌P.Aeruginosa)、革兰氏阳性菌(金黄色葡萄球菌S.aureus、蜡样芽孢杆菌B.cereus)、白色念珠菌(C.albicans)均有明显抑菌活性,且在抑菌有效浓度范围内溶血活性不明显。抗病毒活性试验显示,Dybowskin-YJ对虹彩病毒有一定抑制作用,其作用机制尚待进一步研究。……