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鳖用四价细菌灭活疫苗免疫防治应用研究

沈锦玉;尹文林;潘晓艺;郝贵杰;徐洋;何天雷;王友慧;叶金云

  以纯化的中华鳖血清中免疫球蛋白IgM为免疫原,利用淋巴细胞杂交瘤技术,共制备了3株针对中华鳖免疫球蛋白的特异性单克隆抗体,并建立了由单抗3H3介导的三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)方法进行疫苗免疫效果的评价。将分离自中华鳖主要细菌性疾病如肠道出血性败血症、鳖穿孔病(疖疮病)、红脖子红底板病、鳖腐皮病的四株病原菌,在3.5%福尔马林溶液中24h全部灭活;经灭活的四株菌加蜂胶作为佐剂,制成总含菌量为6×109个/mL的四价菌苗。小批量免疫50只体重约100~150g/只的健康中华鳖,后肢肌肉注射,免疫剂量为0.2mL/只;并设置对照组,后肢肌肉注射等量的生理盐水,共接种20只健康中华鳖。分别于免疫前及免疫后10d、20d、30d、40d、50d、60d、80d和100d时,随机采集3只受免中华鳖和1只对照组中华鳖的血液并制备血清,用所建立的单抗介导的TAS-ELISA方法测定血清中抗体ELISA效价。结果表明:当中华鳖免疫后40d,血清中抗体ELISA效价达到最高,为1:1.28×104。免疫后50d将受免中华鳖分成四组,分别用四种菌株以5LD50(9×106个/mL)攻击,0.5mL/只,进行攻毒实验,免疫保护率均达到100%,而对照组死亡率均为100%。这些结果表明,用蜂胶作为免疫佐剂进行鳖用四价疫苗的免疫,取得了较好的免疫效果。同时用上述制备的鳖用四价疫苗开展鳖生产性免疫预防试验,试验表明鳖存活率有较大提高,能有效地防治养殖鳖主要病害的发生。……