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致病微生物标志性DNA片段的分离方法

张玉心;丁廷波;杨渝珍

  目的为了快速、简便和微量的提取混合病原菌的基因组DNA,进而获得不同病原菌的特异性DNA片断用于进一步的基因诊断。方法我们模拟小鼠体内巨噬细胞吞噬细菌的实际情况,并改良裂解试剂直接提取与巨噬细胞共存的细菌基因组DNA为模板,采用双重-PCR法扩增目的基因。结果同时提取得到革兰氏阳性菌(以金葡菌为代表)和革兰氏阴性菌(以产毒性大肠杆菌ETEC为代表)的混合基因组DNA;并且以此为模板通过双重PCR一次性扩增得到两种菌的特异性DNA片断。结论这是一种直接从巨噬细胞中合并提取混合菌基因组DNA,进而获得不同病原菌标志性DNA片段的简便方法。……