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TACE基因膜外功能区在大肠杆菌中高水平表达和纯化

■科;陈慧;韩玲;杨渝珍

  目的:构建人TACE基因膜外功能区原核表达载体,在大肠杆菌中高水平表达并进行分离纯化,探讨影响TACE在大肠杆菌表达系统中高效及可溶性表达的因素,并获得高纯度蛋白为进一步制备TACE抗血清以及用噬菌体肽库筛选TACE抑制剂打下基础。方法:利用本室已克隆到的TACE基因膜外功能区和含有二硫键异构酶(DsbA)的原核表达载体构建融合表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,用SDS-PAGE凝胶电泳分析产生的蛋白为可溶或是包涵体形式;用Ni柱分离纯化TACE膜外功能区蛋白。结果:融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导后可高水平表达,表达形式为包涵体,重组蛋白表达量占细胞总蛋白量的;利用两种方法使用Ni柱纯化TACE膜外功能区,获得高纯度蛋白,蛋白纯度为。结论:利用融合蛋白技术使TACE膜外功能区在原核表达系统中获得了高效表达,且分离纯化到了较高纯度的蛋白,为下一阶段工作打下了坚实的基础。……