手机知网 App
24小时专家级知识服务
打 开
手机知网|搜索

极低密度脂蛋白受体转录调控的信号转导机制研究

王燕

  目的:VLDL、β-VLDL可诱导巨噬细胞VLDLR表达,促进细胞摄取富含甘油三酯的脂蛋白形成泡沫细胞。本研究探讨介导VLDL、β-VLDL诱导巨噬细胞VLDLR转录的主要信号转导途径及VLDLR在此过程中的作用。并观察主要信号转导途径对巨噬细胞胞内脂质堆积的影响。方法:以不同信号途径关键激酶的抑制剂或激动剂处理小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,然后与VLDL、β-VLDL温育,采用Western Blot方法检测细胞内的ERK1/2活性,以半定量RT-PCR的方法检测胞内VLDLRmRNA水平,并将质粒pGL4.2VR-luciferase瞬时转染RAW264.7细胞,同上处理后,检测胞内luciferase的活性,以间接反应VLDLR5’端转录调控区的转录活性。然后在ldl-A7对照细胞和ldl-A7-VR细胞中检测并比较经VLDL、β-VLDL刺激后两种细胞胞内ERK1/2活性及VLDLR5’端转录调控区转录活性的变化。最后以主要相关信号途径的抑制剂处理RAW264.7细胞,然后与VLDL、β-VLDL温育,检测胞内胆固醇和甘油三酯的含量。结果: 1.VLDL、β-VLDL可刺激RAW264.7细胞内ERK1/2活性。此效应可被GF109203X(PKC抑制剂)阻断。2.PD98059(ERK1/2抑制剂)和GF109203X可抑制VLDL、B-VLDL诱导的RAW264.7细胞VLDLRmRNA表达和VLDLR5’端转录调控区转录活性。而P38抑制剂SB203580对此无明显影响。cAMP同构体8-bromo-cAMP仅可轻度抑制VLDL、β-VLDL诱导的VLDLR5’端转录调控序列的转录活性,但不影响细胞VLDLR mRNA水平。3.VLDL、β-VLDL可激活ldl-A7细胞内ERK1/2活性及VLDLR5’端转录调控区转录活性。ldl-A7细胞高表达VLDLR后此效应显著增强。4.PD98059可降低经VLDL、β-VLDL温育后RAW264.7细胞胞内胆固醇和甘油三酯含量。结论:蛋白激酶C依赖的ERK1/2信号级联是介导VLDL、β-VLDL诱导巨噬细胞VLDLR转录的主要信号转导途径;且此效应至少有部分由VLDLR介导:特异性抑制此信号途径可降低VLDL、β-VLDL诱导的巨噬细胞胞内脂质堆积。……