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基于适配体的实时定量PCR检测血清中的人促红细胞生成素

唐吉军;徐华;郭磊;陈佳;谢剑炜

  基于适配体的高特异识别能力和可扩增性,构建了经磁分离后实时定量PCR检测重组人促红细胞生成素-α(rHuEPO-α)的新方法;针对实际血清样品中高丰度蛋白质等的干扰,利用碱基互补配对原理设计合成了分别与适配体两端引物区结合的互补链,通过凝胶迁移阻滞分析(EMSA)筛选出最佳的互补链,并将生物素化的互补链连接到链霉亲和素磁珠上,以此为探针捕获复杂基质中形成的待测复合物。研究结果表明,结合该样品前处理策略,该方法可成功地应用于正常人血清中的rHuEPO-α定量检测,检出限为25pmol/L,线性范围为50 pmol/L~50 nmol/L。……