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基于毛细管电泳技术牡丹的SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

史倩倩;王雁;周琳

  本试验以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP-PCR反应程序进行了研究,确定了适合的反应程序,即94℃预变性5min;94℃变性1min,33℃退火1min,72℃延伸1min,共5个循环;随后94℃变性1min,52℃退火1min,72℃延伸1min,共35个循环;最后72℃延伸10min。并基于毛细管电泳技术,采用正交设计L_(18)(3~7)对SRAP-PCR反应体系的五因素(Taq酶,Mg~(2+),模板DNA,dNTP,引物)3个水平对牡丹SRAP-PCR反应体系进行了研究,建立了牡丹SRAP最佳反应体系:模板DNA 50ng,dNTP 0.25 mmolL~(-1),Mg~(2+)浓度2.5mmolL~(-1),引物浓度0.4μmolL~(-1),Taq DNA聚合酶0.5U,总体积为25μL。Taq DNA聚合酶0.5U,总体积为25μL。各因素对扩增结果影响程度均不同:dNTPs>引物>DNA模板>Mg~(2+)>Taq酶。运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出扩增条带清晰、多态性好的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠。这一体系的建立及多态性引物组合的筛选为今后利用SRAP技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础。……