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根癌农杆菌介导‘粗枝’大叶黄杨P5CS基因转化扶芳藤的研究

马文慧;张倩;尚爱芹;赵梁军

  采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404菌株)介导法,以‘粗枝 大叶黄杨(Euonymus japonicus‘Cu Zhi ,别名北海道黄杨)的△~1-吡咯啉-5-羧酸合成酶基因(P5CS)转化扶芳藤(Euonymus fortunei)的下胚轴。研究了农杆菌菌液浓度、侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)和PPT浓度(phosphinothricin)等因素对遗传转化的影响。结果表明:根癌农杆菌浓度OD_(600)=0.5,侵染30min,共培养3d,共培养基中添加50μmol/L AS,有利于获得较高的遗传转化效率。在PPT浓度为0.5mg·L~(-1)的分化培养基中筛选到4株抗性植物,经PCR检测初步表明目的基因已经整合到扶芳藤基因组中。……