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番茄抗黄瓜花叶病毒病基因转移的研究

徐丽;张胜利;张建;陈颖;王兴智;朱筱娟;梁秀梅

  本研究利用携带双元载体质粒pTOK233(含有GUS报告基因和卡那霉素抗性基因NPTⅡ)的根癌农杆菌菌株LBA4404,用子叶为外植体,以GUS基因瞬时表达效果为指标,建立优化了番茄高效转化体系。外植体大小对愈伤组织的形成有显著影响,相对小的外植体利于愈伤的形成。光照培养比暗培养更利于愈伤组织的形成。当农杆菌侵染外植体浸泡时间为8-10分钟,菌液浓度OD600约为0.15,稀释液pH=5.0,乙酰丁香酮使用浓度为50μmol/L,以及共培养时间为两天时获得了最高的转化效率。以建立的转化体系,将农杆菌LBA4404携带的CMV-RNA2基因导入番茄子叶,获得了抗黄瓜花叶病毒(cucumber mosaic virus,CMV)病的番茄转基因植株。转化的番茄植株田间试验显示,转化植株抗100 mg/L的卡那霉素。将转基因番茄进行分子生物学鉴定,证明外源基因已整合到转化植株中。……